超微量分光光度計之所以能檢測微量樣品的原液無需稀釋,是因為可以通過調(diào)節(jié)液滴的光程,從而進(jìn)行了“光程稀釋”的作用。光程越小,可檢測的樣品濃度越高(需一定限制內(nèi),處于朗伯-比爾定律線性范圍內(nèi))。這一過程可通過液柱、液膜等形式實現(xiàn),設(shè)備具有一個關(guān)鍵部件即-光程調(diào)節(jié)器。
光程調(diào)節(jié)器對應(yīng)檢測方法為樣品拉伸法(液柱法)。通??汕袚Q2-5個光程,通過下部元件一定的機械結(jié)構(gòu)運動,如轉(zhuǎn)動,使上部元件進(jìn)行高低切換,使液柱的高度改變,調(diào)節(jié)光程。此結(jié)構(gòu)是否需要校準(zhǔn)/調(diào)整,取決于下部元件的設(shè)計,如為馬達(dá)等部件,則需要校準(zhǔn)。值得注意的是,此類切換器的上部原件暴露在外,需要注意清潔,避免灰塵及紙屑落入夾縫,否則將導(dǎo)致光程的較大偏差。
超微量分光光度計與傳統(tǒng)分光光度計相比,其所需樣品體積小,僅需0.5-2μl;無需比色皿,用移液槍直接將樣品滴加到檢測平臺上,測量時樣品自動形成液柱,檢測完成后只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈即可,避免了因為比色皿清洗不凈帶來的交叉污染。
超微量分光光度計一般具有多個光程(電機控制自動選擇),而傳統(tǒng)分光光度計的光程為10 mm,超微量分光光度計樣品無需稀釋,測量范圍可達(dá)到常規(guī)分光光度計的50倍。